Đây là kỹ thuật được thiết lập trên cơ sở miễn dịch học, hóa sinh và kỹ thuật hiển vi, sử dụng phản ứng kháng nguyên – kháng thể để xác định vị trí chất kháng nguyên trong mô hoặc tế bào.
Máy phân tích huỳnh quang là một thiết bị sử dụng hiệu ứng huỳnh quang của các chất huỳnh quang để phát hiện. Trên que thử sắc ký miễn dịch có chất huỳnh quang, sau khi được nguồn sáng kích thích chiếu xạ và hấp thụ ánh sáng tới có bước sóng nhất định, nó có thể phát ra huỳnh quang có bước sóng dài hơn một chút, khi nguồn sáng ngừng chiếu xạ, ánh sáng phát ra cũng biến mất. Fluorescein được sử dụng làm nhãn để liên kết với các kháng thể đã biết mà không ảnh hưởng đến các đặc tính miễn dịch của nó, sau đó kháng thể được đánh dấu bằng fluorescein làm thuốc thử tiêu chuẩn, được sử dụng để phát hiện và xác định các kháng nguyên chưa biết. Sau phản ứng miễn dịch giữa kháng nguyên và kháng thể, fluorescein liên kết với kháng thể được giải phóng. Càng nhiều kháng nguyên được phản ứng miễn dịch với kháng thể, thì càng có nhiều fluorescein được giải phóng. Huỳnh quang Hiệu ứng càng tạo ra nhiều huỳnh quang thì ngược lại, càng ít huỳnh quang được tạo ra. Bằng cách chuyển đổi cường độ huỳnh quang thành tín hiệu điện, hàm lượng của kháng nguyên tương ứng trong chất được phát hiện có thể được biết bằng cách phân tích tín hiệu điện.
